تحديد بعض خواص السيليلوز البكتيري المنتج من عصير التمر ودراسة بعض العوامل المؤثرة في مسامية وسمك األغشية السيليلوزية

تحديد بعض خواص السيليلوز البكتيري المنتج من عصير التمر ودراسة بعض العوامل المؤثرة في مسامية وسمك األغشية السيليلوزية سنان محمد جاسم المالكي الهام إسماعيل كلية الزراعة / جامعة بغداد الخالصة : نفذت التجربة في مختبر التقنية الحيوية التابع لقسم علوم األغذية / كلية الزراعة/ جامعة بغداد في سنة 1011 لدراسة بعض الخواص المهمة للسيليلوز المنتج من بكتريا.A xylinum. SA1 وهي سمك غشاء السيليلوز وقابليته على حمل الماء ودراسة مساميته وقوة الشد وقياس درجة البلورة من خالل فحص ray( ) -X ومقارنته مع السيليلوز النباتي وتحليل طيف األشعة تحت الحمراء )IR( للتأكد من هويته. حيث أوضحت النتائج ان سمك الغشاء بلغ 3.3 مليمتر وقابليته على حمل الماء كانت عالية مقارنة بالسيليلوز من مصدر نباتي ومساميته بلغت %64 وقوة شده بلغت 1.1 ميكاباسكال وكذلك اتضح إن السيليلوز البكتيري هو أكثر بلورة من السيليلوز النباتي وبمعامل بلورة بلغ أكثر من %40 وعند تحليل طيف األشعة تحت الحمراء )IR( للسيليلوز البكتيري للتأكد من هويته وجد مطابقة الشكل لطيف األشعة تحت الحمراء للسيليلوز المأخوذ من موسوعة أطياف األشعة تحت الحمراء للمركبات الكيمياوية. كما ودرس تأثير أوساط زرعية مختلفة على كمية السيليلوز ووزن الخاليا الجاف وعلى مسامية وسمك األغشية السيليلوزية الناتجة ودرس تأثير حجم اللقاح ومدة الحضن و تركيز القاعدة المستخدمة في تنقية الغشاء السيليلوزي وطريقة التجفيف على مسامية الغشاء السيليلوزي فوجد تأثرهما الواضح باختالف تلك العوامل. IDENTIFY SOME OF THE PROPERTIES OF BACTERIAL CELLULOS E PRODUCED FROM DATES SYRUP AND Assessing SOME OF THE FACTORS AFFECTING THE POROSITY AND THICKNESS OF THE MEMBRANES CELLULOS Sinan M. J. AL- Maleki Elham I. AL- Shamary Abstract: The experiment in a biotechnology laboratory of the Department of Food Science / College of Agriculture / University of Baghdad, in 2012 to study some of the important properties of cellulose produced from bacteria A. xylinum. SA1, a thickness of membrane cellulose, and ability to water holding, and study its porosity, and tensile strength, and measuring the degree of crystallization by examining (X-ray) and compared with cellulose plant and analyzing infrared spectroscopy (IR) to confirm his identity. Where the results showed that the thickness of the membrane was 3.3 mm, and its ability to water holding was high comparison with plant origin, and porosity of 49%, and the power intensity of 1.2 Mikabascal, as well as became clear that cellulose bacterial is more elaborate than cellulose plant and a factor of crystallization rate of more than 60 %, البحث مستل من رسالة ماجستير للباحث األول 131

and when analyzing the infrared spectrum (IR) of bacterial cellulose to confirm his identity was found matching the shape of the infrared spectrum of Cellulose taken from the Encyclopedia of infrared spectra of chemical compounds. Also studied The effect of different agricultural media on the amount of Cellulose and the dry weight of the cells and the porosity and thickness of the Cellulose membranes were studied. In addition, the vaccine volume, incubation periods and alkali concentration used in the purification of the Cellulose membrane, and drying method on a porous membrane of Cellulose were highlighted. and influenced by different factors. المقدمة: يعد السيليلوز البكتيري من السكريات المتعددة الخارجية غير الذائبة بدأ االهتمام به في المدة مابين عامي 1441-1441 م في اليابان ( Dubey وآخرون,. Krystynowiez; 1001 وآخرون 2002.,.) يشابه السيليلوز البكتيري كيميائيا السيليلوز النباتي إذ يتكون أيضا من سالسل من الكلوكان ) 4 1 ( ß لكنه يختلف عنه في اغلب الخواص الفيزيوكيميائية والميكانيكية والريولوجية. ( Chawla وآخرون,. 2009 (. ويوجد نوعان من السيليلوز I وهما Iα و Iβ اعتمادا على الترتيب بين سالسل البوليمر يكثر النوع األول في السيليلوز المنتج من الطحالب والبكتريا مقارنة مع السيليلوز النباتي ومحتوى السيليلوز البكتيري المنتج بالمزارع الساكنة من النوع Iα أعلى مقارنة بالسيليلوز المنتج في المزارع المتحركة ( Mark وآخرون,. 2007 (. استخدم الفلبينيون السيليلوز البكتيري ألول مرة في صناعة حلوى Nata de Coco التي القت استحسانا كبيرا لقوامها الناعم ومحتواها العالي من األلياف وانتشرت بسرعة إلى اليابان والدول المجاورة لما لها من خصائص جيدة حيث تعتبر من األغذية الوظيفية ذات الطاقة الواطئة و لها دور في تنظيم عمل الجهاز الهضمي لما تحويه من كمية كبيرة من األلياف التي ال يستطيع اإلنسان هضمها لعدم امتالكه األنزيمات المحللة لها ومن ثم فإنها ال تسهم بتزويد الجسم بالطاقة Sheu) وآخرون,. Cai;1000 Budhiono;2000, وآخرون,.1999 (. كما يستخدم السيليلوز البكتيري في إنتاج ما يسمى Kombuch elixir أو Manchurian tea أو Tea fungus أو Candida sp وبعض أنواع الخميرة Acetobacter الناتج من تنمية بكتريا Magical mushroom,pichiasp,debaromyces على وسط يحوي على مستخلص الشاي والسكر فالسيليلوز الناتج ومستخلص التخمر الحاوي على حامض الخليك والكيتونات وحامض الكلوكونك يستفاد منها في تحسين الصحة.)Int.1( و يستخدم السيليلوز البكتيري في إنتاج بدائل للحم إذ صنع في هذا المجال منتج يعرف ب Monascus nata complex الحاوي على Monocolink الخافض للكولسترول وعلى ألياف الحمية البكتيرية ويعد هذا المنتج من بدائل اللحم الجديدة لألشخاص النباتيين إذ يمتلك لونا" ونسجه مشابهة لتلك التي تميز الكبد Liver والتونة Tuna Izadi) وآخرون,. Marlett;1011 وآخرون.,.) 1001 يستخدم السيليلوز البكتيري مثخن ومثبت بمدى واسع من األرقام الهيدروجينية ودرجات الحرارة وظروف اإلذابة والتجميد للمواد الغذائية المختلفة Son) وآخرون,. ;1001 Cheng وآخرون,. Shyu;1001.(1006., Ng and حيث تم استخدام السيليلوز البكتيري مادة مثخنة ومثبتة في صناعة المثلجات القشطية والصلصة والحلوى والكريم الحامضي ومنتجات األلبان المجمدة وفي الوجبات السريعة ذات الطاقة الواطئة Int.3( Chawla ; Int.2 ; وآخرون,. 2009 (. ومن االستخدامات المهمة للسيليلوز البكتيري في يومنا هذا استخدامه في مجال التغليف حيث استخدم في تغليف العديد من المنتجات الغذائية كالفواكه ولحوم األسماك والصوصج وذلك لمنع تدهور الغذاء وإطالة العمر االفتراضي له وضمان صحة وسالمة المستهلك ( Denise وآخرون,. 2011 (. ففي السنوات األخيرة بدأ االهتمام بمواد التغليف المضادة للميكروبات وهو من اكبر السوق المتنامية في يومنا هذا Comstock) واخرون,.1006) وقد القى اهتماما كبيرا في الصناعات الغذائية بسبب الزيادة في الطلب على السلع االستهالكية المعالجة 131

بالحد األدنى) food )Minimally processing والخالية من المواد الحافظة. تشير االتجاهات الحالية إلى أن تغليف المواد الغذائية عنوان الحلول الفعالة والتي سيتم تطبيقها خالل المراحل المقبلة,2011 ; 2009,Wilfred ; 1Sasithorn) Elegir وآخرون,. 2008 ). واستخدم أيضا في تقييد أنزيم االميليز للمحافظة عليه من درجات الحرارة العالية والمنخفضة ومن درجة الحموضة المنخفضة Ying(,2008 Sheng and (. إما في المجاالت األخرى غير الغذائية فقد حقق السيليلوز البكتيري نجاحات كبيرة والسيما في المجال الطبي المتالكه قوة شد عالية ومسامية مشابه لألنسجة الحية والقدرة العالية على حمل الماء حيث استخدم السيليلوز الرطب ضمادات لعالج حروق الجلد الشديدة والقرحة والجروح الشديدة Thawatchai) وآخرون,. 2007;0 (2007,Aase.عالوة على ذلك يبدو أن السيليلوز بطريقة أو بأخرى يعزز من نمو خاليا الجلد البشري واستخدم ضماداته في عالج الجروح كونها توفر الرطوبة المناسبة التي تقلل الم الجرح وتعجل الشفاء الرتفاع مسامية السيليلوز مما يسهل من نقل العالج عبر األغشية السيليلوزية ومنع دخول الملوثات Retegi) وآخرون,. 2010 (. واستخدم في إصالح األنسجة المتضررة داخل الجلد دون التأثير على خاليا الجسم والتسبب بااللتهابات واستخدم مادة مالئة بسبب رطوبته العالية بين الفقرات عن طريق زراعة البكتريا المنتجة للسيليلوز في ذلك المكان وبنسبة نجاح % 45 وفي عمليات التجميل وفي صناعة األوعية الدموية الدقيقة وفي إصالح العظام.( Jeffrey Czaja ; 2010., وآخرون,. 2007 ; Pericles وآخرون,. ) 1004 ويستخدم السيليلوز البكتيري على المستوى الصناعي في تحضير أغشية ذات استخدامات مختلفة اعتمادا على حجم فتحاتها إذ مكن استخدامها كأغشية في تقنية الترشيح الفائق وأغشية نفاذة للغازات ( Luz وآخرون ;,.2006 kuan وآخرون,.2009 (. واستخدم في صناعة مكبرات الصوت ذات الجودة العالية واستخدم في صناعة أغلفة لألجهزة الحساسة الن قوة الشد له أكبر من اغلب المواد المغلفة األخرى Sameshima).(2004,Holmes;,2006 Keshk and وبناءا على ما تقدم هدف البحث الى دراسة بعض الخواص المهمة للسيليلوز المنتج باستخدام بكتريا A.xylinumSA1 وعصير التمر كوسط غذائي لإلنتاج. المواد وطرائق العمل دراسة بعض الخواص المهمة للسيليلوز المنتج من بكتريا A.xylinumSA1 تقدير سمك غشاء السيليلوز قدر سمك الغشاء السيليلوزي المنتج تحت الظروف المثلى حسب الطريقة التي أوردها Ankerوآخرون,.(2000 ( باستعمال المايكروميتر )Micrometer( بأخذ معدل السمك لست مواقع اختيرت بصورة عشوائية من المحيط إلى مركز الغشاء السيليلوزي. قابلية السيليلوز البكتيري على االحتفاظ بالماء أجريت التجربة كما أوضحتها الشمري (2007), بإضافة 10 مليلتر من الماء إلى كل من السيليلوز البكتيري الجاف والسيليلوز النباتي ( ورقة ترشيح ) بنفس الوزن والقطر والسمك تقريبا. ثم جففا في فرن o حراري هوائي oven بدرجة حرارة 40 م وقدر وزنها على مدد زمنية متعاقبة تراوحت من 10 إلى 110 دقيقة وقدرت قابلية السيليلوز على االحتفاظ بالماء بالفرق بين الماء المحمول على السيليلوز وبين الفقد الحاصل في الماء كنسبة مئوية وفق المعادلة اآلتية: الوزن بعد الترطيب )غم( الوزن النهائي )غم( المحتوى المائي =)%( -011 ) )011 الوزن بعد الترطيب )غم( 133

(2010)., وآخرون,. Weihua قياس مسامية )Porosity( الغشاء السيليلوزي قدرت مسامية الغشاء السيليلوزي المنتج حسب الطريقة التي اعتمدها وباالعتماد على المعادلة التي أوردها kitaoka وآخرون,.(1997) والتي تنص على استخرج الوزن بالماء بنقع السيليلوز الجاف في الماء المقطر ألكثر من 11 ساعة بدرجة حرارة الغرفة وقدر الوزن. 011 الوزن الرطب الوزن الماء المسامية % = الوزن الرطب الوزن الجاف قياس قوة الشد فحص السيليلوز البكتيري الناتج من بكتريا.A xylinum AS1 / وزارة العلوم والتكنولوجيا. باستخدام جهاز لقياس قوة الشد في قسم الكيمياء FT-IR A. xylinum AS1 فحص السيليلوز البكتيري باستخدام جهاز IR فحص السيليلوز البكتيري الناتج من بكتريا وزارة العلوم والتكنولوجيا. باستخدام جهاز في قسم الكيمياء / دراسة تأثير بعض العوامل في بعض خواص السيليلوز تأثير استخدام أوساط زرعية مختلفة في مسامية وسمك األغشية السيليلوزية. درس تأثير أستخدام اوساط زرعية مختلفة ذات مصادر كاربونية مختلفة في مسامية وسمك االغشية المنتجة من.A xylinum AS1 شملت هذه االوساط وسط عصير التمر المحضر من التمر الزهدي وبتركيز 10 بركس ووسط HS القياسي ووسط HS المحور بأستبدال السكروز محل الكلوكوز مصدرا للكاربون ووسط HS المحور بأستبدال الكلوكوز بعصير التمر والحاوي على 1 لتر عصير التمر )10 بركس( 5 غم ببتون 5 غم مستخلص الخميرة 6.75 غم Na 2 HPO 4-12 H 2 O 1.15 غم حامض الستريك. عدل الرقم الهيدروجيني لجميع األوساط إلى 4 ووزعت في دوارق سعة 300 مليلتر وبواقع 100 مليلتر لكل دورق 1 ₒ وعقمت بالمؤصدة بدرجة حرارة 111 م وضغط 15 باوند/ انج. 0 لقحت جميع األوساط المحضرة أعاله ب 5 مليلتر من معلق العزلة المنتخبة وحضنت الدوارق بدرجة حرارة 30 م مدة 7 أيام.استخلص السيليلوز المنتج وقدرت كميته حسب الطريقة التي أوردها Neelobonوآخرون,.(2007) وقدر سمك األغشية الناتجة ومساميتها حسبما مذكور في الفقرتين حسبما مذكور أعاله. تأثير حجم اللقاح في مسامية األغشية السيليلوزية وسمكها قدرت مسامية األغشية وسمكها بأستخدام حجوم لقاح مختلفة تراوحت مابين 1 11 مليلتر وبفارق 1 مليلتر من لقاح الخر يحوي المل الواحد على 10 4 خلية/ مل بأستخدام عصير التمر) 10 بركس( وسطا لالنتاج. تأثير مدة الحضن في مسامية األغشية السيليلوزية وسمكها درست تأثير مدد حضن مختلفة استمرت 10 يوم في مسامية وسمك االغشيية السيليلوزية المنتجة من عصير التمر بأستخدام بكتريا.A xylinum AS1 قدرت المسامية وسمك االغشية السيليلوزية حسب الطرق المذكورة أعاله. 136

تأثير تركيز القاعدة المستخدمة في التنقية على مسامية األغشية السيليلوزية : أجريت التنقية للسيليلوز الناتج من العزلة.A xylinum AS1 بأستخدام عصير التمر )10 بركس( حسب الطريقة التي اوردها Neelobon وآخرون (2007). وباستخدام محاليل من القاعدة Na OH بتراكيز مختلفة شملت (0.1 0.5 ( 1 N. قدرت بعدها سمك االغشية السيليلوزية الناتجة ومساميتها حسبما مذكور في اعاله. تأثير طريقة التجفيف في مسامية األغشية السيليلوزية : استخدمت طريقة التجفيف في الفرن الهوائي Air drying والتجفيف باستخدام طريقة التجفيد Freeze-drying وحسبما ذكره Weihua وآخرون )1010( لألغشية السيليلوزية المنتجة من العزلة.A xylinum AS1 وقدرت مسامية األغشية الناتجة من طريقتي التجفيف وحسبما ورد في اعاله. النتائج والمناقشة : دراسة بعض خواص السيليلوز المنتج من العزلة المحلية للبكتريا.A xylinum تقدير سمك غشاء السيليلوز إن لدراسة سمك األغشية السيليلوزية أهمية كبيرة لما له من عالقة وثيقة ببعض الخصائص الميكانيكية للغشاء كقوة الشد ونفاذية بخار الماء وغيرها من الخواص األخرى. قدر سمك الغشاء السيليلوزي المنتج تحت الظروف المثلى من العزلة المحلية المحلية.A xylinum AS1 باستخدام عصير التمر وسطا طبيعيا إلنتاج السيليلوز إذ بلغ سمك الغشاء المنتج 3.3 مليمتر. وقد أشارت الشمري )1007( إلى أن سمك غشاء السيليلوز المنتج من بكتريا A.xylinum FEA 48 قد بلغ 1.35 و 1.15 مليمتر باستخدام الفركتوز والكلوكوز كمصدرين للكاربون في وسط اإلنتاج على التوالي خالل مدة حضن استغرقت 7 أيام. فيما أشار,(2002) Ciechanska إلى إن سمك غشاء السيليلوز المنتج من بكتريا.A xylinum قد بلغ 1.65 مليمتر في وسط اإلنتاج الصناعي الذي يحوي على الكلوكوز مصدرا للكاربون خالل مدة حضن 7 أيام. قابلية السيليلوز البكتيري على االحتفاظ الماء : إن قابلية السيليلوز البكتيري العالية على االحتفاظ بالماء أكسبته أهمية خاصة واهتماما كبيرا في السنوات األخيرة وخصوصا فيما يتعلق باستعماالته الطبية والصيدالنية ( Cheng وآخرون,.2002(. يوضح من الشكل )1( قابلية السيليلوز البكتيري المنتج من العزلة.A xylinum AS1 على االحتفاظ ب 10 مل من الماء مقارنة مع السيليلوز النباتي المتمثل بورق الترشيح المشابه للغشاء السيليلوزي تقريبا من حيث السمك والقطر. إذ يالحظ احتفاظ السيليلوز البكتيري بحوالي %57 من محتواه المائي في حين احتفظت ورقة الترشيح بحوالي %36 من محتواها المائي بعد 30 o دقيقة من التجفيف في 40 م لكنها فقدته بالكامل بعد مرور 40 دقيقة تقريبا. في حين فقد السيليلوز البكتيري كامل محتواه المائي تقريبا بعد مرور 143 دقيقة على التجفيف وهذا يعني أن للسيليلوز البكتيري قدرة على االحتفاظ بالماء لزمن يبلغ ضعف الزمن الذي يحتفظ به السيليلوز النباتي تحت ظروف التجربة. ويرجح أن يرجع هذا إلى كثرة التفرعات واالرتباطات الجانبية بوساطة األواصر الهيدروجينية في السيليلوز البكتيري والتي تمنحه التميز في قابلية االحتفاظ بالماء. إن هذه النتيجة اتفقت مع الشمري )1007( وقد أشار Retegi وآخرون,.(2010) إلى أن السيليلوز البكتيري يحتفظ بما يتراوح ما بين %44-41 من وزنه بالماء. 135

الشكل )0 (: النسبة المئوية لكمية الماء المحمولة على السيليلوز البكتيري المنتج من البكتريا.A o xylinum SA 1 والسيليلوز النباتي خالل مدة زمنية معينة وفي درجة حرارة 01 م. قياس مسامية الغشاء السيليلوزي : قدرت مسامية الغشاء السيليلوزي المنتج من بكتريا A.xylinum SA1 تحت الظروف المثلى لإلنتاج باستخدام عصير التمر وسطا لإلنتاج إذ وجد أن مسامية الغشاء المنتج قد بلغت %64 في حين أشار Weihua وآخرون,.( 2010 ) إلى أن مسامية الغشاء السيليلوزي المنتج من بكتريا A.xylinum باستخدام الطريقة الساكنة قد بلغت %77 و %47 و %45 عند استخدام السكروز والكلوكوز والفركتوز مصادر للكاربون في وسط اإلنتاج وعلى التوالي مما يدل على تأثر مسامية األغشية المنتجة بنوع مصدر الكاربون وعلى الظروف البيئية وهذا ما أكد الباحثون أنفسهم. قد يعود سبب انخفاض مسامية الغشاء المستحصل عليه من استخدام عصير التمر كوسط لإلنتاج إلى كون األخير مصدرا جيدا للكاربون الحتوائه على الكلوكوز والفركتوز بنسب متساوية تقريبا وعلى قليل من السكروز مما يفسح المجال أمام البكتريا إلنتاج كميات كبيرة من السيليلوز الذي ينتج بشكل طبقات متوازية متداخلة األلياف مما يؤدي إلى تقليل مساميتها وهذا ما أكده Weihuaوآخرون,.(2010). قياس قوة الشد : تعد قوة الشد خاصية ميكانيكية هامة وهي تعبر عن أقصى جهد سحب stress( )pulling يمكن للغشاء أن يتحمله قبل انقطاعه في أثناء فحص الشد وتعد مقياسا كميا لقوة الغشاء على التمدد وقابليته ( Gennadios وآخرون,.,.1993 ). بلغت قوة الشد للغشاء السيليلوزي المنتج من العزلة المحلية SA1..A xylinum باستخدام عصير التمر وبمراعاة الظروف المثلى لالنتاج 1.1 ميكاباسكال كما مبين الشكل )1(. تعكس قوة الشد مدى التماسك التركيبي للغشاء السيليلوزي الناتج من الترابط والتشابك للطبقات المتوازية للسيليلوز بعضها فوق بعض بواسطة األواصر الهيدروجينية الجانبية المتعددة القوية مما يؤدي إلى زيادة قوة الشد لألغشية السيليلوزية. وقد أشارا,.(2011) Shuai & Jin إلى ارتفاع قوة الشد إلى 1.56 ميكاباسكال عند إضافة الجينات الصوديوم إلى وسط اإلنتاج القياسي بعد أن كانت 0.56 ميكاباسكال بدون إضافة مما يؤكد تأثر قوة الشد للسيليلوز البكتيري بالظروف البيئية لوسط اإلنتاج. 134

الشكل )2( : فحص قوة الشد للسيليلوز البكتيري المنتج من بكتريا.A xylinum SA1 باستخدام وسط اإلنتاج الطبيعي )عصير التمر (. تحليل طيف األشعة تحت الحمراء (IR) يبين الشكلين) 3 ( و) 6 ( طيف األشعة تحت الحمراء( IR ) للسيليلوز المنتج من الوسط الطبيعي )عصير التمر( والسيليلوز القياسي )النباتي( على التوالي. ويالحظ من هذه اإلشكال وجود تشابه واضح بينهما وهذه النتيجة تتفق مع Chartes(,2010) في موسوعة أطياف األشعة تحت الحمراء للمركبات الكيمياوية. إذ أشارت جميع اإلشكال وبشكل واضح إلى الحزمة الخاصة بمجموعة OH الموجودة في السيليلوز والتي تظهر بشكل قمة عريضة عند التردد 3400-3100 سم ويمكن تفسير ظهورها بهذا الشكل هو وجود األواصر الهيدروجينية بين مجاميع OH في السيليلوز والتي كثيرا ما تظهر في أطياف األشعة تحت الحمراء للكاربوهيدرات عامة. وتظهر بشكل واضح في جميع األطياف الحزمة الخاصة ب C-H) ) بشكل قمة حادة عند التردد 2980 سم أما التي تظهر مابين 1500-1000 سم فهي تعطي دليال مقبوال على أنها عائدة إلى اآلصرة C-H bending والتي تظهر عند التردد 1467 سم واآلصرة C-OH والتي تظهر بشكل قمة قوية وعريضة عند التردد 1070 سم واآلصرة C-O والتي تظهر عند التردد 1040 سم وهذه هي ابرز المجاميع الفعالة في السيليلوز أما المنطقة الواقعة من 1000 سم فما دون فهي ليست بذات أهمية ألنها تعود إلى تأرجح وانحناء اآلصرة C-C والتي تظهر عند التردد 1000-800 سم وعند التردد 500 سم والتي ال يخلو منها مركب عضوي وهذا ما كده Silversteino وآخرون,.(1996). 137

Wavenumber (cm- الشكل )3( فحص IRللنموذج من السيليلوز المنتج من بكترياSA1 A.xylinum باستخدام الوسط الطبيعي )عصير التمر( Wavenumber (cm-1) الشكل )4(: فحص IR لنموذج من السيليلوز القياسي دراسة تأثير بعض العوامل على بعض خواص السيليلوز المنتج من بكتريا.A xylinum SA 1 تأثير استخدام أوساط زرعيه مختلفة في مسامية األغشية السيليلوزية وسمكها كما موضح في الشكل )5( والشكل )4( فان أعلى مسامية تم الحصول عليها هي %75 باستخدام وسط HS- medium المحور باستبدال الكلوكوز بالسكروز كمصدر للكاربون في حين بلغ سمك الغشاء 0.1 مليمتر وبكمية 131

سيليلوز 1.71 غم/لتر وبوزن خاليا جاف بلغ 0.1 غم /لتر وهو اقل سمك تم الحصول عليه مقارنة باألوساط األخرى يليه الوسط الطبيعي المتمثل بعصير التمر ومن ثم وسط HS- medium وأخيرا وسط HS- medium المحور بإضافة عصير التمر بتركيز %10 بدال من سكر الكلوكوز إذ بلغت المسامية لألغشية الناتجة من هذه األوساط )44 46( 47 % وبسمك )1.1 3.1( 1.1 مليمتر وبكمية سيليلوز بلغت ) 11.1 1.3 4.5 (غم/ لتر وبوزن خاليا جاف )1.4 6.1( 3.3 غم/لتر على التوالي. وقد أشار Nakai,.وآخرون) 1444 ( إلى أن السبب في انخفاض كمية السيليلوز المنتجة من السكروز التي تؤثر في مسامية األغشية الناتجة وسمكها هو أن بكتريا.A xylinumsa 1 ال تمتلك انزيم Sucrose synthase وبذلك فهي تحتاج إلى أربع خطوات انزيمية لتحويل السكروز إلى UDP-glucose وأشار إلى أن استخدام السكروز مصدرا وحيدا للكاربون يحد من نمو البكتريا مقارنة بالكلوكوز مما يقلل من كمية األلياف الدقيقة المنتجة وبالتالي الحصول على أغشية ذات مسامية عالية وسمك منخفض ومن النتائج المستحصل عليها يمكن االستنتاج بأنه كلما زادت كمية السيليلوز المنتجة ينتج عنه زيادة في سمك األغشية وانخفاض في المسامية وذلك ألنه زيادة كمية السيليلوز تعني زيادة في عدد طبقات السيليلوز المتوازية والمتكونة من ألياف دقيقة متشابكة مع بعضها ترتبط بقوة باألواصر الهيدروجينية وبالتالي يؤدي إلى زيادة سمك األغشية وقلة مساميتها. وتختلف كمية السيليلوز المنتجة باختالف مصادر الكاربون وبالتالي فان مصدر الكاربون يؤثر في األغشية الناتجة ووزن الخاليا الجاف لها وهذا ما أكده Weihua واخرون,.( 2010 ( في تأثير مصدر الكاربون على مسامية األغشية السيليلوزية المنتجة وسمكها من بكتريا. Acetobacter xylinum الشكل )5(: تأثير األوساط الزرعية المختلفة )مصادر الكربون ) على مسامية األغشية السيليلوزية المنتجة وسمكها من بكتريا.A xylinum SA 1 بحجم لقاح %8 وبمدة حضن 7 أيام 134

الشكل )0 (: تأثير األوساط الزرعية المختلفة )مصادر الكربون (على كمية السيليلوز المنتج ووزن الخاليا الجاف من بكتريا.A xylinum SA 1 بحجم لقاح %8 وبمدة حضن 7 أيام. تأثير حجم اللقاح في مسامية األغشية السيليلوزية وسمكها: يتبين من النتائج في الشكل )7( أن سمك ومسامية األغشية السيليلوزية المنتجة من بكتريا Acetobacter xylinumsa1 قد تأثرت بحجم اللقاح فقد زاد سمك الغشاء السيليلوزي بزيادة حجم اللقاح حتى بلغ أقصاه 3.3 مليمتر عند حجم اللقاح األمثل %1 وقد لوحظ انخفاض في سمك الغشاء ولو بنسبة قليلة بزيادة حجم اللقاح حيث بلغ )3-1.4( مليمتر عند حجم اللقاح %10 و %11 على التوالي وقد يعزى ذلك إلى حصول تنافس بين خاليا البكتريا على المغذيات الضرورية للنمو والتكاثر وإنتاج السيليلوز في وسط اإلنتاج بزيادة حجم اللقاح وبالتالي انخفاض في إنتاج السيليلوز. أما مسامية الغشاء السيليلوزي المنتج فقد كانت على العكس تماما من ما هو عليه عند قياس سمك الغشاء السيليلوزي فقد انخفضت المسامية بزيادة حجم اللقاح حتى بلغت %64 عند حجم اللقاح %1 وعند زيادة حجم اللقاح بدأت مسامية الغشاء السيليلوزي تقل لكن بنسبة قليلة حيث بلغ )66-64(% عند حجم اللقاح %10 و %11 وعلى التوالي.ولقد أشار Backdahl وآخرون,.(2006) إلى إن زيادة حجم اللقاح يؤدي إلى زيادة في الكتلة الحيوية وبالتالي زيادة في إفراز األلياف المتناهية في الصغر والتي أدت إلى إنتاج غشاء سيليلوزي أكثر إحكاما وسمكا وتقلصا للمسامية وقد اتفقت النتائج مع ما توصل إليه Weihuaوآخرون,.(2010) من الحصول على أعلى سمك واقل مسامية للغشاء السيليلوزي المنتج من بكتريا Acetobacter xylinum باستخدام حجم اللقاح %1. 160

Porosity Thickness Porosity Thickness مجلة الفرات للعلوم الزراعية 80 70 60 50 40 30 20 10 0 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 Porosity Thickness الشكل )7(: تأثير حجم اللقاح على سمك األغشية السيليلوزية المنتجة ومساميتها من بكتريا.A xylinum SA 1 باستعمال عصير التمر وسطا لإلنتاج وبمدة حضن 7 أيام. تأثير مدة الحضن في سمك األغشية السيليلوزية ومساميتها : يبين الشكل) 1 ( زيادة سمك الغشاء السيليلوزي الناتج بزيادة مدة الحضن وبلغ أقصاه 3.3 مليمتر بعد 16 يوم من الحضن رافق ذلك انخفاضا في المسامية والتي بلغ اقلها %64 بعد 16 يوم من الحضن وقد يعود السبب في ذلك إلى الزيادة الحاصلة في الكتلة الحيوية في وسط اإلنتاج وبالتالي زيادة في إفراز األلياف المتناهية الصغر والتي أدت إلى زيادة في سمك الغشاء السيليلوزي المنتج وانخفاض في مساميته. ذكر Weihua وآخرون,.(2010) أن سمك الغشاء السيليلوزي الناتج من بكتريا Acetobacter xylinum باستخدام وسط اإلنتاج المعروف HS- medium بلغ 0.3 مليمتر في اليوم الثالث من مدة الحضن. 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 A. xylinumsa1 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 Porosity Thickness الشكل )8(: تأثير حجم اللقاح على سمك األغشية السيليلوزية المنتجة ومساميتها من بكتريا باستخدام عصير التمر وسطا طبيعيا لإلنتاج وبمدة حضن 7 أيام. 161

تأثير تركيز القاعدة في مسامية األغشية السيليلوزية يوضح الشكل )4( تأثير تراكيز مختلفة للقاعدة المستخدمة في تنقية السيليلوز بعد استخالصه من وسط اإلنتاج على مساميته إذ يالحظ من الشكل انخفاض المسامية بزيادة تركيز القاعدة حيث بلغت المسامية )64 ) 71 44 باستخدام التراكيز )1 0.1( 0.5 مولر على التوالي وقد أشار Georgeوآخرون,.(2005) و Brigid وآخرون,.( 2009 ),. و Weihuaوآخرون,.(2010) إلى انه بزيادة تركيز القاعدة يزداد انتفاخ األلياف السيليلوزية مما يؤدي إلى زيادة في قطرها وانخفاض في حجم الفتحات وبالتالي انخفاض في المسامية. الشكل )9 (: تأثير تركيز القاعدة ( )NaoH على مسامية األغشية السيليلوزية المنتجة من بكتريا.A xylinum SA1 باستخدام عصير التمر وسطا طبيعيا لإلنتاج وبمدة حضن 7 أيام. تأثير طريقة التجفيف في مسامية األغشية السيليلوزية يوضح الشكل )10( تأثير طريقة التجفيف في مسامية األغشية السيليلوزية المستحصل عليها من بكتريا.A xylinumsa1 إذ يالحظ ارتفاع المسامية في األغشية المجففة بالتجفيد والتي وصلت إلى حوالي %13 مقارنة مع تلك المستحصل عليها في األغشية المجففة بالفرن الهوائي والبالغة %44 تقريبا. وقد عزا,.(2004) Marabi, and Saguy و Svensson وآخرون,.(2005) السبب إلى انه عملية التجفيف بالتجفيد تمنع من تقلص الفتحات في أثناء عملية التجفيف في حين أشار Karathanos وآخرون,.(1996) إلى أن التجفيف بالفرن الهوائي يؤدي إلى االنهيار والفقدان السريع للمحتوى المائي في حين تحدث هذه الحالة بصورة تدريجية في التجفيد. 161

الشكل )01(: تأثير طريقة التجفيف في مسامية األغشية السيليلوزية المنتجة من بكتريا Acetobacterxylinum SA1 باستخدام عصير التمر وسطا طبيعيا لإلنتاج وبمدة حضن 7 أيام. المصادر : الشمري الهام إسماعيل )1007 (. إنتاج السيليلوز البكتيري من العزلة المحلية Acetobacter xylinum FEA48 ودراسة بعض خواصه واستخداماته في الصناعات الغذائية. أطروحة دكتوراه كلية الزراعة. جامعة بغداد. مصادر الشبكة الدولية للمعلومات http://www.trib.com/~kombu/elixir.html. Kombucha Elixir Or Manchurian Tea. Kombucha Center Homepage. 9/1/2012 http:// www.wkap.nl / journalhome. htm / 0969 0239 Cellulose 11/2/2012 http:// www. Botany.com / Utexas. edu / fac staff / fac pages / الموقع (Int. Net 3) mbrown / position 1. hom. Microbial Cellulose: Anew Resource for wood, paper, textile, food and specialty products. الموضوع 11/11/2011 التاريخ Aase. B.( 2007). Sebastian concaro, mats brittberg, paul gatenholm, bacterial cellulose as a potential meniscus implant, Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine, Volume 1 Issue 5, Pages 406 408. Anker, M.; Stading, M. and Hermansson, A. (2000). Relationship between the microstructure and the mechanical and barrier properties of whey proteins. J. Agir. Food Chem. 48: 3806 3816. 163 الموقع الموضوع التاريخ الموقع الموضوع التاريخ ت (Int. Net 1) (Int. Net 2)

Backdahl, H. ; Helenius, G. ; Bodin, A. ; Nannmark, U. ; Johansson, B. and Risberg, B. (2006). Mechanical properties of bacterial cellulose and interactions with smooth muscle cells. Biomaterials., 27(9):2141 2149. Brigid, A.; Mckenna, D.; Mikkelsen, J.; Bernhard, W.; Michael, J.; Gidley, N. and Menzies, W. (2009). Mechanical and structural properties of native and alkalitreated bacterial cellulose produced by Gluconacetobacter xylinum strain ATCC 53524, Cellulose.,16:1047 1055. Budhiono, B.; Rosidi, A.; Taher, H. and Iguchi, M. (1999). Kinetic aspects of bacterial cellulose formation in nata-de-coco culture system, Carbohydr. Polym. 40 : 137 143. Cai, J. (2000). Analysis of cellulolytic activities of chimeric protiens from Clostridinm cellulovorans. M.Sc. Thesis, Department of Biotechnology, University of New South Walas. Chartes, J.P. (1981). The Aldrich library of Infra red spectra. 3 rd ed. U.S.A. p.m235-7. Chawla, P. R.; Ishwar, B. B.; Shrikant A. S. and Rekha, S. S. (2009). Fermentative Production of Microbial Cellulose, Food Technol. Biotechnol. 47 (2) 107 124. Cheng, H.P.; Wang, P.M.; Chen, J.W. and Wu, W.T. (2002). Cultivation of Acetobacter xylinum in modified airlift reacter. Biotechnol. Appl. Biochem. 35:125-132. Ciechanska, D.; Strnszczyk, H.; Kazimiierezak, J.; Guzinska, K.; Pawlak, M., E.; Kozlowska, G.; Matusiak, G. and Dutkiewicz, M. (2002).New Electro-acousitic Transducers Based on Modified Bacteriel Cellulose. Abstracts, No.,1(36). Comstock, K.; Farrell, D.; Godwin, C. and Xi, Y. (2004). From hydrocarbons to carbohydrates: food packaging of the future. Website:http:depts.washington.edu/poeweb/gradprograms/envmgt/symposium/ Green Packaging Report. Czaja, W.K.; Young, D.j.; Kawecki, M. and Brown Rm, Jr. (2007).The future prospects of microbial cellulose in biomedical applications., Biomacromolecules, Jan,8(1): 12. Denise, M. ; Rosilene, A. and Adenise, L. (2011). Application of bacterial cellulose conservation of Minimally processed Fruits. Revista Brasilcira de Tecnologia Agroindustrial., 5(1):356-366. Dubey, V.; Saxena, C.; Singh, L.; Ramana, K. V. and Chauhan, R. S. (2002). Separation and purification technology, 27, p. 163. Elegir, A.; Kindl, G.; Sadocco, P. and Orlandi, M. (2008). Development of antimicrobial cellulose packaging through laccase-mediated grafting of phenolic ompounds G. Elegir et al. / Enzyme and Microbial Technology 43 : 84 92. Gennadios, A.; Brandenburg, A. H.; Weller, C. L. and Testin, R. F. (1993). Effect of ph on properties of wheat gluten and soy protein isolate films. J. Agric. Food Chem., 41 (11): 1835-1839. 166

George, J.; Ramana, K. V., Sabapathy, S. N.( 2005). Jagannath, J. H., bava, A. S., International Journal of Biological Macromolecules., 37: p. 189. Holmes, D. (2004). Bacterial Cellulose. University of Canterbury Christchurch, New Zealand: Degree of Master of Engineering in Chemical and Process Engineer. Izadi, Z.; Nasirpour, A.; Izadi, M. and Izadi, T.(2012). Minireview reducing blood cholesterol by a healthy diet., International Food Research Journal 19(1): 29-37. Jeffrey. P.(2010). Production design and evaluation of vascular grafts made of Bacterial cellulose., Department of Chemical and Biological Engineering Division of Industrial Biotechnology Chalmers University Of Technology Goteborg, Sweden. Karathanos, V.T.; Kanellopoulos, N.K. and Belessiotis V.G. (1996). Development of porous structure during air drying of agricultural plant products. J Food Eng 29:167 183. Keshk, S. and Sameshima, K. (2006). Influence of Lignosulfonate on Crystal Structure and Productivity of Bacterial Cellulose in a Static Culture. Journal of Enzyme and Microbial Technology., 40: 4 8. Kitaoka, K.; Yamamoto, H.; Tani, T.; Hoshijima, K. and Nakauchi, M.(1997). Mechanical strength and bone bonding of a titanium fiber meshblock for intervertebral fusion. J Orthop Sci 2:106 113. Krystynowicz, A. ;Cazaja, W.; Wictorowska, A.; Goncalves. M.; Turkiewicz, M. and Bielccki, S. (2002). Factors affecting the yield and properties of bacterial Cellulose. J. Ind. Microbiol. Biotechnol., 29:189-195. Kuan, C.; Jeffrey, M. and Ali, D. (2009). Effect of different additives on bacterial cellulose production by Acetobacter xylinum and analysis of material property., Department of Agricultural and Biological Engineering, The Pennsylvania State University, University Park, PA 16802, USA., 16:1033 1045. Luz, D. ; Carreno, P. ; Luis, A. and Alberto, C. (2006). Effect of culture and purification conditions of physicochemical and transport properties In bacterial cellulose membranes. Biomaterial., 27:145-151. Marabi, A. and Saguy, IS. (2004). Effect of porosity on rehydration of dry food particulates. J Sci Food Agric 84(10):1105 1110. Mark, P. S.; Haiyuan, P.; Seema, D. and Peter, G.(2007). Bacterial cellulose networks for reinforcement of polylactide., International Conference on Composite Materials. 16 TH. Marlett, J.A.; Mc Burney, M.I. and Slavin, J.L.(2002). Position of the American Dietetic Association: Health implications of dietary fiber Journal of the American Dietetic Associat, 102:993-1000. Nakai, T.; Tonouchi, N.; Konishi, T.; Kojima, Y.; Tsuchida, T. and Yoshinaga, F.(1999). Enhancement of cellulose production by expression of sucrose synthase in Acetobacter xylinum. Proc Natl Acad Sci USA 96(1):14 18. 165

Neelobon, S.; Jiraporn, B. and Suwanee, T. (2007). Effect of culture conditions on bacterial cellulose (BC) production from Acetobacter xylinum TSTIR 976 and physical properties of BC parchment paper.suranaree J.Sci.Technol.14(4) :357-365. Ng,C,C. Shyu, Y.T. (2004). Development and production of cholesterol- lowering Monascus-nata complex., World J. Microbial. Biotechnol. 20,875 879. Retegi Pericles, N. M.; Sheila, C. R.; Oduvaldo, M. P.; Viciany, E. F.; Sara, L. R.; Joao, F.; and Fernanda, D.(2009). In vivo and in vitro evaluation of an Acetobacter xylinum synthesized microbial cellulose membrane intended for guided tissue repair, licensee BioMed Central Ltd. Retegi, N. G.; Pena, C.; Zuluaga, R.; Castro, C.; Ganan, P.; de la Caba, K. and Mondragon, I. (2010). Bacterial cellulose films with controlled microstructure mechanical property relationships, Technologies Group, Polytechnic School, Europa 1, 20018 Donostia-San Sebastian, Spain., 17:661 669. Sasithorn, K.(2011). Antibacterial Activity of Formulated Fish Snack from Bacterial Cellulose, International Conference on Bioscience, Biochemistry and Bioinformatics IPCBEE vol.5:293-243. Sheng, C. and Ying, K.(2008). Application of bacterial cellulose pellets in enzyme immobilization, Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 54 : 103 108. Sheu, C, F.; Wang, L. and. Shyu,V. (2000). Fermentation of Monascus purpureus on Bacterial Cellulose-nata and the Color Stabilityof Monascus-nata Complex, journal of food science vol., 65:342-345. Shuai, Z. and Jin L. (2011). Preparation and Properties of Bacterial Cellulose/Alginate Blend Bio-Fibers. Journal of Engineered Fibers and Fabrics Volume 6, Issue 3:69-72. Silversteino, R. M. and weloster, F.X.(1996). Spectrometric identification of organic compounds, 6 th ed. John Wiley and Sons eds. Inc. U.S.A. Son, H. J.; Heo, M. S.; Kim, Y. G. and Lee, S.J. (2001). Biotechnol. Appl. Biochem., 33, p. 1. Svensson, A.; Nicklasson, E.; Harrah, T.; Panilaitis, B.; Kaplan, D. L.; Brittberg, M. and Gateholm, P. (2005). Bacterial cellulose as a potential scaffold for tissue engineering of cartilage. Biomaterials., 26: 419-431. Thawatchai, M.; Seiichi, T. and Ratana, R.(2007). Impregnation of silver nanoparticles into bacterial cellulose for antimicrobial wound dressing, Carbohydrate Polymers, doi:10.1016/j.carbpol. 7. (25):9. Weihua,T.; Shiru, J.; Yuanyuan, J. and Hongjiang, Y. (2010). The influence of fermentation conditions and post-treatment methods on porosity of bacterial cellulose membrane., World J Microbiol Biotechnol., 26:125-131. Wilfred, S. R.(2009). Biobased Packaging - Application in Meat Industry., Veterinary World, Vol.2(2): 79-82. 164